操作条件要求：
由于ACQUITY UPLC BEH HILIC色谱柱不含有任何键合相，因此其pH使用范围为1-8，可以在90℃稳定范围内使用
同其它任何色谱柱一样，在pH、压力以及高温条件下使用将缩短色谱柱寿命
色谱柱平衡：
用50倍柱体积的50/50乙腈/水平衡，如果流动相中含有缓冲盐则要求流动相中缓冲盐的zui终浓度是10 mmol/L（以水相部分的浓度计算）；
在开始进样前，用20倍柱体积的起始流动相平衡后再进样
如果使用梯度条件，在进样前用8-10倍柱体积的流动相平衡
没有充分平衡的色谱柱将可能会出现保留时间的波动
总是保持流动相中缓冲液的浓度为10mM（包括梯度条件下的应用）将得到更好的峰形
流动相要求：
总是经常保持至少5％的极性溶剂在流动相体系中或梯度流动相中（如5％水，5％甲醇或2％水＋3％甲醇等），这将保证HILIC色谱填料始终处于水化润湿状态
在流动相体系中至少需要保证含有40％的有机溶剂（如乙腈）
尽量避免使用磷酸盐体系的流动相（磷酸盐缓冲液可能会在HILIC流动相体系中析出）
同甲酸或乙酸流动相相比，甲酸铵或乙酸铵缓冲溶液作流动相可以得到重现性更好的结果。如果方法中一定要用甲酸或乙酸，应该用0.2%（v/v）而不是0.1%（v/v）
进样溶液的要求：
如果可能，进样溶剂应该是100％有机溶剂，要尽可能去除样品溶液中的水或将其含量zui低化。选择洗脱强度弱的HILIC溶剂如乙腈、异丙醇、甲醇等
通用的进样溶液是75/25乙腈/甲醇，使用此条件可以获得较好的样品溶解度和色谱峰形
避免使用水或DMSO作进样溶剂（色谱峰形很差）
如果样品内含有水或DMSO，需要使用反相SPE技术将溶剂体系转换为乙腈。如果确实不能进行此操作，需要用有机溶剂稀释水或DMSO。
其它需要注意的问题：
ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色谱柱仅仅是用来分析和保留强极性碱的，酸性、中性或非极性化合物没有保留
对于分子量低于200道尔顿的强极性碱，ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色谱柱的*流速范围是0.4~0.8ml/min
同Atlantis HILIC 硅胶基质的色谱柱相比，ACQUITY UPLCTM BEH HILIC色谱柱的保留要弱（梯度条件下保留约低20％，等度条件下保留约低35～65％），这是由于BEH颗粒的表面硅羟基浓度较低的原因
在HILIC的使用中，请注意水是洗脱能力zui强的溶剂，因此样品溶液中必须尽可能避免含水
摸索条件建议使用一个梯度条件（从95％乙腈至50％乙腈的梯度），如果没有保留，则用95：3：2的乙腈：甲醇：水相缓冲液进行等度分析
将流动相中的水换成甲醇、丙酮或异丙醇也能提高保留
请确保进样针清洗的弱清洗溶剂是起始流动相（如高比例有机溶剂），否则峰形将变差