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您何时需要使用菲罗门色谱柱呢?
发布时间:2020-02-13   点击次数:407次
   菲罗门色谱柱的相关知识点你都了解清楚了吗?
  您何时需要使用色谱柱呢?
  分析非常复杂,而且性质差异很大的混合化合物时;
  需要一个单一的方法来分离极性和非极性的可离子化或是中性化合物,而且使用可用在液质的流动相时;
  无法使用梯度分析时;?发现单一的疏水或是离子作用无法产生足够的分离效果时;
  不想在太多不同的色谱柱中挑选以进行不断的方法筛选时;
  发现单一疏水或是离子作用的色谱柱产生峰形差和柱效低时;
  进行离子化合物的制备时;
  在分析复杂的混合物时,想节约金钱和时间;
  菲罗门色谱柱异常冲洗步骤:
  1、低pH的高浓度中性盐(如0.5M硫酸钠溶液,硫酸调pH 3.0)冲洗15倍柱体积,有助于移除碱性蛋白;
  2、含有机溶剂(如10%-20%的甲醇、乙腈)的缓冲盐溶液(如50mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0)冲洗15倍柱体积,有助于冲洗掉疏水蛋白;
  3、加入助溶剂有助于除去固定相上强吸附的物质(如通过氢键作用吸附等);
  4、按照色谱柱测试报告的进样条件进对照品测试柱效;
  菲罗门色谱柱技术的差距在哪里?
  色谱柱技术包括填料技术和装柱技术,填料技术自不待言,填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单,不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度,装柱工艺都有所不同,要装出紧密、稳定、均一的柱床,更多是一门艺术,需要经验积累。
  国内和国外想比,我认为色谱柱的差距在于:国内公司以前都不会自己开发填料,一般买国外现成填料装柱,买到的填料质量控制权不在自己手里。另外因为装柱历史短,经验积累少,装柱工艺也没有完全达到国外水平。另外,对色谱柱性能很关键的基础材料-----裸硅胶,国产的还不过关,在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产品相比,差距很大。
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