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制备色谱柱的维护方法
发布时间:2021-04-08   点击次数:61次

制备色谱柱的维护方法

The maintenance of the preparation of chromatographic column

 

一、建议使用保护柱,避免颗粒进入色谱柱,引起堵塞;

 

二、建议选择合适pH范围的色谱柱,避免填料溶剂老化;

 

三、缓冲盐的正确使用:

缓冲盐通常使用不当会析出,堵塞筛板和填料,使填料板结,柱压升高,阻碍基质上键合相的碳链自由舒展,使色谱柱保留能力下降,柱效降低,缩短其使用寿命,缓冲盐析出后很难去除,因此正确的使用缓冲盐对延长色谱柱的使用寿命非常重要,具体方法如下:

“使用前过渡,使用后冲洗!”

1)等度条件:制备前后用过渡流动相冲洗柱体积不少于20-30个柱体积,或制备完成后用过渡流动相以1.0mL/min(根据柱规格调整)冲洗过夜;

2)梯度条件:制备前,用与初始流动相组成相同的流动相以工作流速冲洗色谱柱不少于20-30个柱体积,制备后,用该过渡流动相冲洗色谱柱不少于20-30个柱体积,且梯度尽量平缓,避免缓冲盐析出;

3)过渡流动相:有机相和水相的比例和分析流动相中两相比例一致,或者水相比例高于分析流动相,彻底不含缓冲盐;

 

四、避免强保留物质在色谱柱保留:

强保留物质在色谱柱中的累积是一个缓慢的过程,引起峰变宽和拖尾,使柱效下降,保留时间变化,柱压长高;对复杂样品很难判断其是否含有强保留物质,因此要预防这一切的方式,坚持每天分析完成后用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱20个柱体积以上。

清洗方法:

1)未使用缓冲盐,每天使用完成后用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱20个柱体积以上;

2)使用缓冲盐,用上述方法去除缓冲盐后,用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱20个柱体积以上;

3)补救方法:水→乙腈→异丙醇(或氯坊)→乙腈→水,每一步需要冲洗不少于30个柱体积。

注意:不要轻易打开柱头,因为柱头一旦打开,很难恢复到新柱的水平,因为柱头打开而造成的检测后果,客户自行负责。

 

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