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岛津制备HPLC 色谱柱的选择方法
发布时间:2020-01-20   点击次数:735次

填料的选择

在进行制备 HPLC 时,需要选择纯度尽可能高,并可同时得到大量化合物的色谱柱。硅胶基体填充制备 HPLC 色谱柱,广泛用于合成化学、天然物化学等领域。反相制备 HPLC 色谱柱利用不同化学键合相保持峰型,实现高纯度精制。特别是 Inertsil 系列制备 HPLC 色谱柱同时具备 HPLC 分析色谱柱的高分离性能和低吸附性。此外,在进行制备 HPLC 时,与样品负荷量的大小、较短的色谱柱清洗时间、再平衡化时间快速化、溶剂去除的速度等相关的洗脱液的选择很重要。可全面满足上述项目要求的 Inertsil ODS-3 是更适于反相 HPLC 制备的色谱柱。

填料

特性

InertSustain C18

耐久性极高,使用强酸强碱样品及洗脱液时推荐使用。

Inertsil ODS-4

保留能力中等,理论塔板数、分离度适中。

Inertsil ODS-3

保留能力极强,可获得大负荷量的色谱柱,制备的首要之选色谱柱。

除上述之外,也提供其他反相、正相、SEC、手性制备用色谱柱。

 

 

色谱柱内径和负荷量、流量关系

制备 HPLC 色谱柱的内径从 6.0mm 到 100mm 不等,可以根据使用目的及使用装置的设定流量范围不同进行选择。填料及色谱柱长度等内径以外的条件全部相同的话,流量及样品负荷量根据色谱柱的横截面积的比例调整后,几乎可以得到相同的色谱图。以下是制备 HPLC 常用的制备柱内径及使用流量的总结,供大家参考。

内径

负荷量

使用流量标准(mL/min) *1

手性

备注

反相·正相

SEC

HILIC

4.6mm

1

1

0.2~0.3

0.5

1

反相、正相、HILIC、手性的规模放大研究一般使用内径4.6mm的色谱柱。

7.6-

8.0mm

2.7

2.7

0.5~1.0

1.4

2.7

可以用在普通分析装置上的半制备 HPLC 色谱柱。用 SEC 的规模放大研究一般使用内径 7.6 ~ 8.0mm的色谱柱。

10mm

5

5

1.0~1.5

2.4

5

14mm

9

9.2

1.8~2.5

4.6

20mm

19

19

3.8~5.4

9.5

19

制备 HPLC 用色谱柱。由于流量范围增大,需要使用装置。而且,内径 50mm 以上的尺寸,为了使安装配管时简单化,大多采用法兰型式的色谱柱。

30mm

45

45

9.0~14

21

45

50mm

130

130

26~39

60

50

*3

100mm

240

480

 *2

48~72

 *2

120

*2

200

*3

*1:5μm 粒径柱的情况

*2:10μm 粒径柱的情况

*3:20μm 粒径柱的情况

 

色谱柱长度

柱长

特性

50mm 以下

主要作为制备柱的保护柱。

50~100mm

分离没有障碍的话,可实现短时间制备。

100~250mm

常用的长度。制备HPLC中,推荐使用容易取得高理论塔板数的250mm色谱柱。

250mm 以上

制备液相为了进行高流量分析,使用粒径大于10μm、压力低的填料。由于大粒径填料不易取得高理论塔板数,在制备HPLC中会使用长色谱柱弥补低理论塔板数这一缺陷。而且,尺寸排阻色谱为了达到相同目的,也会使用长柱。

 

制备HPLC 规模放大

使用制备HPLC 色谱柱研究纯化条件时,所需样品量和溶剂量多,造成成本高。所以,一般使用分析色谱柱探讨精制条件,然后规模放大到制备色谱柱。

但是,如果不使用具有与分析色谱柱同等性能的制备色谱柱,则可能会造成分离效果不佳。Inertsil 即使是大口径色谱柱,峰对称性也很好,对称因子(Asy)接近1,理论塔板数(N)在长度250mm 时维持着近20,000 段。因此,可顺利实现从内径4.6mm到50mm 的规模放大。

 

岛津制备HPLC 色谱柱

岛津JET 制备色谱柱

岛津制备HPLC 保护柱

岛津 PREP 经济型柱套柱芯式制备柱保护柱

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