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常规反相色谱柱安装及使用维护指南

更新时间:2019-05-05点击次数:3293

新色谱柱开启和安装的推荐步骤:

1. 开启色谱柱的包装盒,查看色谱的测试报告;

2. 根据色谱柱身上箭头标明的流向先将色谱柱入口端连入系统,柱出口端先不要连接;

3. 0.1 mL/min 流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱,然后在2 min内将流速升至0.5 mL/min;

4. 当溶剂均匀的从柱出口端流出,停流速,将色谱柱出口端接到系统检测器上;

5. 重启流速,然后在0.1 mL/min 流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱30 min,在10 min内将流速升至1.0 mL/min冲洗30 min。

6. 参考柱效测试报告中的方法,30 min内将流动相梯度转换到柱效测试的流动相条件,然后使用5-10倍柱体积的流动相平衡色谱柱,直至压力与基线稳定。

7. 测试柱效。如果柱效与出厂报告偏移过大,或峰形拖尾就需要进行故障排查或联系上海易创分析仪器有限公司。

 

反相色谱柱的清洗与再生:

1. 发现柱压升高,色谱峰出现严重拖尾、肩峰甚至峰分岔,或分离度降低,有可能是样品溶解度、色谱柱温度、碱性化合物干扰,也很有可能是色谱柱受污染,可以采取以下措施:

2. 如系统有连接在线过滤器或保护柱,首先排查在线过滤器与保护柱,可能需要更新。

3. 使用纯有机相低流速冲洗过夜。(如有使用缓冲盐,应使用不含缓冲液的流动相冲洗1h,然后再梯度过渡到纯有机相低流速冲洗过夜。)

4. 如有机相清洗不能解决问题,可采用如下方法进行色谱柱的清洗和再生。根据样品的性质以及你了解的污染物性质选择清洗方法,用20-30倍柱体积(4.6*250 mm分析色谱柱大约80-120 mL溶剂清洗,流动相温度升至30-50 oC,然后再重复步骤3的方法。

5. 氨基柱

 

反相色谱柱的保存:

1. 反相色谱柱应保存于纯有机相中(如乙腈或甲醇)。色谱柱使用于高温或pH条件下,或停用超过48小时,应当进行简单的清洗过程;

2. 清洗首先用不含缓冲盐的流动相冲洗20-30倍柱体积, 然后30 min内梯度过渡到纯有机相,再用纯有机相冲洗20-30倍柱体积;

3. 后使用原配的柱堵头拧紧,确保堵头溶剂不会挥发。若是氨基柱则应该在步骤2中添加0.1%的氨水,有利于延长氨基柱的寿命;

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